藥品生產(chǎn)企業(yè)微生物實驗室設(shè)計

    藥品檢驗實驗室通常包含理化實驗室和微生物實驗室兩部分；理化實驗室運用物理、化學(xué)的方法對生產(chǎn)用的原輔料、包裝材料、中間體及成品等進行鑒別、含量測定等分析和檢驗，其結(jié)果作為檢品是否符合法定要求和企業(yè)內(nèi)部質(zhì)量標準的依據(jù)。

微生物實驗室一般具有以下功能：

① 按2015《中國藥典》要求，進行微生物檢驗方法的驗證、無菌檢查、微生物限度檢查、***效價的微生物檢定、青霉素酶及其活力測定。

② 按現(xiàn)行2010《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求，對醫(yī)藥工業(yè)潔凈室的潔凈度進行微生物測定，對無菌生產(chǎn)區(qū)環(huán)境日常動態(tài)監(jiān)測以及生產(chǎn)過程 中其他需要進行微生物檢測的地方，如對無菌過濾器的驗證、環(huán)境及設(shè)備**效果的驗證、**效果的驗證、無菌藥品包裝密封性驗證中 微生物挑戰(zhàn)性試驗等。

③ **內(nèi)**檢查、注射劑的不溶性微粒檢查，這類檢查雖不是檢查微生物，但它們對檢查環(huán)境有較高的要求，通常設(shè)在微生物實驗室。

環(huán)境要求                          

微生物實驗室應(yīng)按相關(guān)國家標準制定完整的潔凈室（區(qū)）和隔離系統(tǒng)的驗證和環(huán)境監(jiān)測標準操作規(guī)程，環(huán)境監(jiān)測項目和監(jiān)測頻率及對超標結(jié)果的處理應(yīng)有書面程序。監(jiān)測項目應(yīng)涵蓋到位，包括對空氣懸浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物及物理參數(shù)（溫度、相對濕度、換氣次數(shù)、氣流速度、壓差、噪聲等）的有效地控制和監(jiān)測。環(huán)境監(jiān)測按藥品潔凈實驗室微生物監(jiān)測和控制指導(dǎo)原則（通則9205）進行。

 2 微生物實驗室設(shè)計的有關(guān)要求        

藥品生產(chǎn)企業(yè)微生物實驗室設(shè)計 2010《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》要求藥品生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)負責(zé)藥品生產(chǎn)全過程的質(zhì)量管理和檢驗，并配備與藥品生產(chǎn)規(guī)模、品種、檢驗要求相適 應(yīng)的人員、場所、儀器、設(shè)備。在進行微生物實驗室的設(shè)計時，應(yīng)了解檢驗流程、過程性質(zhì)、有關(guān)標準規(guī)范的規(guī)定等，結(jié)合藥品生產(chǎn)企業(yè) 生產(chǎn)品種、檢驗工作量的大小合理布置相應(yīng)的微生物檢驗功能間。

在藥品的微生物學(xué)檢驗中，為了保證檢測結(jié)果的準確、可靠，針對微生物學(xué)檢驗產(chǎn)生影響的幾種因素需要采取相應(yīng)的措施，通常為以下幾 種：

① 藥品本身的抑菌性或藥品中防腐劑的抑菌性。它們會掩蓋無菌藥品已受污染的事實或造成低于實際污染水平的菌檢結(jié)果。通常采用生長 比較法，在實際檢驗條件下，通過比較對照接種試驗菌或陽性菌在有無供試品的狀態(tài)下的生長情況，來驗證供試品在該檢驗方法下的抑菌 性。

② 標準菌種（試驗菌或陽性菌）制備與傳代、種類及生長狀態(tài)需符合現(xiàn)行《中國藥典》要求。

③ 培養(yǎng)基的促菌生長能力：培養(yǎng)基應(yīng)具備廣譜性，有助于檢品中所有存活微生物的生長。通過接種不同試驗菌并觀察它們的生長狀態(tài)，進 行培養(yǎng)基靈敏度驗證試驗。

④ 檢驗器具，如過濾系統(tǒng)的濾器、濾膜性質(zhì)、 材質(zhì)等性能，淋洗液、稀釋劑、培養(yǎng)基的無菌性及操作程序等，通常進行陰性對照試驗來檢驗其影響。

⑤ 培養(yǎng)條件（溫度、濕度及需氧或厭氧）及檢測環(huán)境應(yīng)符合相關(guān)要求。

2.1 無菌檢查實驗室          

2.1.1 用途       

用于檢查藥典要求無菌的藥品、醫(yī)療器具、原料、輔料及其他品種是否無菌。

2.1.2 《中國藥典》對無菌檢查實驗室要求

藥品生產(chǎn)企業(yè)微生物實驗室設(shè)計 無菌檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10 000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進行，其全過程必須嚴格遵守?zé)o菌操作，防止 微生物污染。單向流空氣區(qū)、工作臺面及環(huán)境應(yīng)定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現(xiàn)行國家標準 進行潔凈度驗證。隔離系統(tǒng)按相關(guān)的要求進行驗證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無菌檢查的要求。

2.2 微生物限度檢查實驗室  

2.2.1 用途

用于檢查非規(guī)定**制劑及其原料、輔料受微生物污染的程度。檢查項目包括**數(shù)、霉菌數(shù)、酵母菌數(shù)及控制菌檢查。

 2.2.2《中國藥典》

對微生物限度檢查實驗室的要求

微生物限度檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10 000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進行。檢驗全過程必須嚴格遵守?zé)o菌操作，防止再污染。單向流空氣區(qū)域、工作臺面及環(huán)境應(yīng)定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現(xiàn)行國家標準進行潔凈度驗證。

 微生物實驗的各項工作應(yīng)在專屬的區(qū)域進行，以降低交叉污染、假陽性結(jié)果和假陰性結(jié)果出現(xiàn)的風(fēng)險。無菌檢查應(yīng)在B級背景下的*單向流潔凈區(qū)域或隔離系統(tǒng)中進行，微生物限度檢查應(yīng)在不低于D級背景下的B級單向流空氣區(qū)域內(nèi)進行。*和B級區(qū)域的空氣供給應(yīng)通過終端高效空氣過濾器（HEPA）。

2.3 ***效價的微生物檢定室    

2.3.1 用途

在適宜條件下，根據(jù)量反應(yīng)平行線原理設(shè)計，通過檢測***對微生物的抑制作用，計算***活性（效價）2.3.2 《中國藥典》[1]對***效價的微生物檢定室的環(huán)境潔凈度未有明確規(guī)定要求 在國家食品藥品監(jiān)督管理局2000年9月頒發(fā)的《藥品檢驗所實驗室質(zhì)量管理規(guī)范（試行）》中第十八條中規(guī)定有“***微生物檢定實驗室分為半無菌操作間和緩沖間。半無菌操作間設(shè)有紫外線燈，操作臺宜穩(wěn)固，并保持水平。實驗室內(nèi)應(yīng)光線明亮，并有控制溫度、濕度的設(shè)備”。通常按潔凈度100 000級設(shè)計。

***效價的微生物檢定實驗所用燒杯、漏斗、移液管、容量瓶、滴管、小鋼管等器皿應(yīng)與其他器皿分開洗滌，檢定用平板與其他培 養(yǎng)基平板也應(yīng)分開洗滌，防止***對其他微生物培養(yǎng)的污染。

2.4 **內(nèi)**檢查用室

2.4.1 用途

利用鱟試劑來檢測或量化由革蘭陰性菌產(chǎn)生的**內(nèi)**，以判斷供試品中**內(nèi)**的*是否符合規(guī)定。適用于某些不能用家兔進行 熱原檢測的品種，如放射**劑腫瘤抑制劑等，因為這些制劑具有細胞毒性而有一定的生物效應(yīng)。目前一般認為特別適用于生產(chǎn)過程中的 熱原控制，因為該檢查法操作簡單，實驗費用少，結(jié)果迅速可得。但該檢查法對革蘭陰性菌以外的內(nèi)**不夠敏感，故尚不能代替家兔熱 原法。

2.4.2 《中國藥典》中要求 進行**內(nèi)**含量測定試驗所用的器皿需經(jīng)處理，以去除可能存在的外源性內(nèi)**，試驗操作過程應(yīng)防止微生物的污染，在清凈環(huán)境中進行，在層流工作臺內(nèi)操作。實驗前，須用肥皂洗手，用75%乙醇（*好用叔丁醇代替乙醇）棉球**。但《中國藥典》中未對**內(nèi)毒素檢查用室的環(huán)境潔凈度明確規(guī)定要求。一般來說**內(nèi)**檢查用室為半無菌操作間：室內(nèi)設(shè)**紫外燈，潔凈度要求一般為100 000 級。也有一些藥廠為了節(jié)省能耗而將其設(shè)置為一般環(huán)境。

2.5 不溶性微粒檢查用室   

2.5.1 用途

在可見異物檢查符合規(guī)定后，用以檢查溶液型靜脈用注射劑中不溶性微粒的大小和數(shù)量。

2.5.2 《中國藥典》[1]要求試驗操作環(huán)境應(yīng)不得引入微粒，測定前的操作應(yīng)在層流凈化臺下進行。玻璃儀器和其他所需的用品應(yīng)潔凈無微粒，本法所用微粒檢查用水（或溶劑）使用前須經(jīng)不大于1.0 um的微孔濾膜濾過。

2.5.3 因《中國藥典》要求注射用水須進行**內(nèi)**檢測，因此溶液型靜脈用注射劑的不溶性微粒檢查可與**內(nèi)**檢查用室設(shè)成一 間，不用專設(shè)一室，配置相應(yīng)的層流凈化臺。

3 有關(guān)問題及案例

3.1 陽性接種室      

（1）微生物檢驗離不開對標準菌種及所檢測的菌種進行各種處理，如培養(yǎng)基的靈敏度檢查、無菌檢查及微生物限度檢查方法的驗證、陽 性對照、***效價的微生物檢定時菌種及菌懸液制備、轉(zhuǎn)接種等，這些活動要直接處理微生物菌種，在一定條件下，許多種類都是病原菌，因此有關(guān)微生物暴露性操作活動盡可能在生物安全柜內(nèi)進行。所有染菌物品、培養(yǎng)物均應(yīng)經(jīng)高壓**處理后再清洗。

（2）無菌檢查及微生物限度檢查中陽性對照菌液加入含供試品的培養(yǎng)基的操作，不能在檢測供試品的無菌室或凈化臺上進行，以免污染 供試品及操作環(huán)境?？稍O(shè)置一間陽性接種室進行上述操作。以前有的將其設(shè)置為一般環(huán)境；有的根本就未專設(shè)此室。

3.2 無菌室    

《中國藥典》要求無菌藥品的無菌性檢查室、非無菌藥品的微生物限度檢查室的環(huán)境潔凈度都為10 000級（局部潔凈度100級），通常都 稱為無菌室；若某藥廠既生產(chǎn)無菌藥品，也生產(chǎn)非無菌藥品，為防止非無菌藥品供試品對無菌藥品的無菌性檢查的污染，有兩種方式：

① 如果同時進行這兩類藥品的檢驗，*好將這兩種無菌室分開設(shè)置二套，使用各自的人凈、物凈系統(tǒng)。此種方式無菌室利用率不高。

② 通常只設(shè)一套無菌室，分期進行這兩類藥品的檢驗，合理安排檢驗規(guī)程、嚴格操作并經(jīng)驗證，確保不對無菌藥品的無菌性檢查產(chǎn)生污 染。

3.3 隔離系統(tǒng)

2015《中國藥典》無菌檢查法中被為可使用的設(shè)施，它能提供并保持與外界環(huán)境隔離的百級潔凈度的操作環(huán)境。隔離操作器所處環(huán)境的 級別取決于它們的設(shè)計及其應(yīng)用。美國藥典并不要求它安裝在潔凈區(qū)/室，但應(yīng)控制無關(guān)人員進入其所處房間；歐盟GMP則建議應(yīng)將它放 置于100 000級的環(huán)境中。

采用隔離操作技術(shù)能*大限度降低操作人員和外界環(huán)境對潔凈空間的影響。它既可用于無菌實驗，又可用于其他需要高潔凈度的多種研究 和實驗。

但隔離操作器的性能與操作程序的驗證尤為重要，隔離用袖管/手套系統(tǒng)應(yīng)進行常規(guī)監(jiān)測，這包括經(jīng)常進行必要的檢漏試驗。隔離系統(tǒng)的 諸多優(yōu)勢如潔凈區(qū)域的隔離化、自動化、小型化等將使其成為無菌區(qū)的發(fā)展未來。

3.4培養(yǎng)室      

用來放置培養(yǎng)各類微生物生長的**培養(yǎng)箱和**培養(yǎng)箱。大多數(shù)將其設(shè)置為一般環(huán)境；也有的將其潔凈度設(shè)置為100 000級。設(shè)計時根據(jù)藥廠相關(guān)部門的要求進行。

3.5 案例圖1中無菌檢查采用環(huán)境潔凈度10 000級下的局部潔凈度100級；

藥品生產(chǎn)企業(yè)微生物實驗室設(shè)計圖2中無菌檢查采用環(huán)境潔凈度100 000級下的無菌隔離系統(tǒng)，對目前需要改造而面積及空調(diào)系統(tǒng)受原有條件限制的微生物實驗室來說較為適用。微生物實驗室的其他輔助設(shè)施在設(shè)計時與理化實驗室一起統(tǒng)籌考慮。

藥品生產(chǎn)企業(yè)微生物實驗室設(shè)計《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》要求藥品生產(chǎn)企業(yè)生物檢定、微生物和放射性同位素的實驗室應(yīng)當(dāng)分時進行。避免實驗間的交叉污染，以不影響數(shù)據(jù)的測定。無菌檢查、微生物室和陽性對照室分開固然能解決不同實驗的交叉污染問題，若與無菌室等共用凈化空調(diào)系統(tǒng)，一旦因操作失誤或其他原因造成環(huán)境污染，則所有同一空調(diào)系統(tǒng)下的實驗室都將被污染，所以其必須是獨立的空調(diào)系統(tǒng)。陽性對照室且回風(fēng)應(yīng)直排，微生物檢查室建議且回風(fēng)應(yīng)直排，只有無菌檢查室可以利用回風(fēng)，這樣才能保證整個環(huán)境不產(chǎn)生交叉污染。